FormacijaNauka

Molekularne biologije metode istraživanja i njihova upotreba

Molekularne biologije metode istraživanja igraju važnu ulogu u modernoj medicini, forenzičkih znanosti i biologije. Zahvaljujući napretku u istraživanju DNK i RNK, osoba je u mogućnosti da istraži genom organizma odrediti uzročnika, da prepoznaju željeni nukleinske kiseline u smjesi kiselina, itd

Molekularno-bioloških metoda. Šta je to?

Nazad u 70-80s naučnika je prvi dešifrirati ljudski genom. Ovaj događaj je dao poticaj razvoju genetskog inženjeringa i molekularne biologije. Studija svojstva DNA i RNA je značilo da je sada moguće koristiti ove nukleinskih kiselina u svrhu postavljanja dijagnoze bolesti, studija gena.

Priprema DNA i RNA

Molekularne biologije dijagnostičke metode zahtijevaju početni materijal: to često nukleinske kiseline. Postoji nekoliko načina za odabir ove supstance iz ćelija živih organizama. Svaki od njih ima svoje prednosti i mane, i to treba uzeti u obzir pri odabiru metoda izolacije nukleinskih kiselina u čistom obliku.

1. Priprema DNK Marmur. Metoda se sastoji u liječenju mješavina alkohola supstanci, taloži rezultat čiste DNK. Loša strana ove metode je upotreba korozivnih supstanci, fenol i kloroform.

2. Izolacija DNK na grani. Glavna supstanca koja se ovdje koristi - je Guanidine tiocijanata (GuSCN). Promoviše taloženje dezoksiribonukleinske kiseline na specijalizirane podloge, iz čega se može naknadno prikupljeni putem posebnih tampon. Međutim GuSCN - je inhibitor TCP, pa čak i mali dio koji biva pohranjen u DNA može uticati na tok lančana reakcija polimeraze, što je važno kada se radi sa nukleinskih kiselina.

3. padavina nečistoća. Metoda se razlikuje od prethodnih po tome što molekule sami ne deponuju dehoksiribonukleinovoy kiselina i nečistoća. Da biste to učinili, koristite jonoizmenjivača. Nedostatak je da nisu svi supstance mogu smiriti.

4. Mass skrining. Ova metoda se koristi u slučajevima kada ne morate imati tačne informacije o strukturi DNK molekula, kao i potrebu da se malo statistike. Razlog je u tome što nukleinske struktura kiselina može oštetiti prilikom rukovanja deterdženata, posebno lužine.

Klasifikacija metoda istraživanja

Svi molekularno-biološke metode istraživanja su podijeljeni u tri glavne grupe:

1. Pojačanje (koristeći mnoštvo enzima). To uključuje PCR - lančana reakcija polimeraze, koji igra važnu ulogu u mnogim dijagnostičkih metoda.

2. Neamplifikatsionnye. Ova grupa metoda je povezana direktno sa radom smjese nukleinskih kiselina. Primjeri su 3 vrste mrlje, in situ hibridizacija, itd

3. Metode bazirane na priznavanju signal sa sonde molekula, koja se vezuje za određenu DNK ili RNK sondu. Primjer - hibridizacije sistem Hibrid rješenje Capture System (HC2).

Enzimi koji se mogu koristiti u molekularnoj biološke metode istraživanja

Mnogi molekularne dijagnostičke tehnike uključuju upotrebu širok spektar enzima. U nastavku se najčešće koriste:

1. ograničenje enzim - "cut" DNK molekula potrebnih dijelova.

2. DNA polimeraze - sintetizira dvostruko nasukan dezoksiribonukleinske kiseline molekula.

3. reverzne transkriptaze (reverzne transkriptaze) - koristi se za sintezu DNK predloška RNK.

4. DNA ligaze - je odgovoran za formiranje phosphodiester veza između nukleotida.

5. exonuclease - uklanja nukleotida od kraja dijelovima dezoksiribonukleinske molekula kiseline.

PCR - osnovni metod DNK pojačanja

Lančane reakcije polimeraze (PCR) je naširoko koristi u modernoj molekularnoj biologiji. Ova metoda, u kojoj jedan DNK molekula mogu se dobiti veliki broj kopija (pojačava molekula).

Glavne funkcije PCR:

- dijagnoza bolesti;

- kloniranje DNA segmenata, Gene.

Za obavljanje lančane reakcije polimeraze zahtijeva sljedeće elemente: početni DNK molekula, a termostabilne DNK polimeraze (Taq ili Pfu), deoxyribonucleotide fosfati (izvori azotnih baza), u prajmera (2 prajmer 1 DNK molekula) i sama tampon sistem koji može obavljati sve reakcije.

PCR se sastoji od tri koraka: denaturacija, prajmer žarenja i istezanje.

1. denaturacije. Na temperaturi od 94-95 stupnjeva Celzijusa proshodit razbiti obveznice vodika između dva lanca DNK, i kao rezultat smo dobili dva jednolančana molekula.

2. bodljikava kapisli. Na temperaturi od 50-60 stepeni javlja pristupanja prajmera na krajevima molekula jednolančane nukleinske kiseline prema vrsti komplementarnosti.

3. Istezanje. Na temperaturi od 72 stupnjeva je sintetiziran kćer dvolančanu molekula dezoksiribonukleinske kiseline.

DNK

Molekularne biologije metode istraživanja često zahtijevaju znanje o redoslijedu nukleotida u molekulu dezoksiribonukleinske kiseline. Da bi se odredio genetski kod sekvenciran. Molekularna dijagnostika budućnosti će se zasnivati na znanje stečeno u određivanju ljudskog sekvence.

Sljedeće vrste sekvencioniranje:

  • sekvenciranje od Maxam-Gilbert;
  • Sanger sekvenciranje;
  • Pyrosequencing;
  • nanoporovoe sekvenciranje.

Similar articles

 

 

 

 

Trending Now

 

 

 

 

Newest

Copyright © 2018 bs.delachieve.com. Theme powered by WordPress.