PCR analiza: šta je to? Kako da se analiza PCR

Ne tako davno razvio pouzdan, vrlo osjetljiva i brza metoda za dijagnozu raznih zaraznih bolesti kod ljudi. Takva metoda se zove "PCR analiza". Šta je to, ono što je njegova suština, ono što on može identificirati mikroorganizama i kako da se to, mi ćemo opisati u ovom članku.

Povijest otkrića

Izmislio lančane reakcije polimeraze (PCR) je američki naučnik Keri Myullis u 1983. U početku, patentirani način postavljanja dijagnoze od strane "Cetus Corporation", u kojem je radio i njegov tvorac. Ali, 1992. sva prava i patenti su prodati kompaniji "Hoffman-La Roche". Nakon toga, ispostavilo se da su slične studije su izvedeni u paralelno i prijavljeni su od strane drugih američkih biologa, kao što je Elis Chen, David Edgar, John SPVK. U 1980. se bave ovom pitanju i Sovjetski naučnici A. Slyusarenko A. Kaledin i S. Gorodeckim. Stoga, kako bi se utvrdilo je jedini vlasnik autorskih prava nije bilo moguće. Mnogi izuzetan biohemičari su doprinijeli razvoju metoda reakcije polimeraze i CERN patentirao svoje inovacije. U ovoj analizi trenutku PCR se provodi u cijeloj posebno opremljenih laboratorija.

SAŽETAK PCR dijagnostiku

PCR analiza: što je to i kako to radi? Suština metode leži u činjenici da pomoću posebnih enzima DNK polimeraze in vitro povećanja obima specifičnih mikroba okruženju. Da biste to učinili u više navrata višestruko dostupan DNK materijala. Prema tome, prisustvo patogena u uzorku iznos će se povećati na račun biohemijske laboratorije manipulacije, a bakterije neće biti teško otkriti u mikroskop.

Kako je proučavanje materijala?

Da izvrši analizu potrebno:

• DNK predloška;
• kapisle materijal koji povezuje krajeve fragmenta;
• termostabilne DNK polimeraze enzima;
• kemikalija, osigurati pravilan rad enzima;
• buffer rješenje je potrebno za stvaranje odgovarajućih uvjeta za rast i razvoj DNK materijala.

Za obavljanje PCR rade 25-30 ponavljanja koja se sastoji od tri koraka: denaturacija, žarenja i istezanje.

Da bismo analizirali polimezarnoy lančanu reakciju pomoću posebnog uređaja - perioda. Modernu opremu vam omogućava da instalirate potrebne za grijanje i cijevi hlađenje programa za eliminaciju grešaka prilikom postavljanja dijagnoze.

Gdje da se prijave dijagnoze?

Polimezarnoy metoda lančane reakcije se koriste u raznim oblastima medicine:

• Forenzičke ga koristi za identifikaciju genetski materijal, kao što su kosa, pljuvačka ili krvi;
• PCR analiza krvi pomaže da genotipa, npr za detekciju pojedinačnih genetskih zasadio odgovor na određeni lijek;
• metodom postavljena rodbinske veze između ljudi;
• -PCR tražio način najviše je postao u medicinskoj dijagnostici za određivanje raznih zaraznih bolesti.

Šta infekcija otkriva PCR?

Dakle, lijek se već dugo uspješno koristi analiza PCR. Šta je to, mi smo već naučili. A neke patogene se mogu otkriti s njim? PCR dijagnosticira sljedeće infekcije :

• hepatitisa A, B, C;
• ureaplasmosis;
• kandidijaza;
• klamidiju;
• mikoplazmoze;
• bakterijske vaginoze;
• infektivne mononukleoze;
• trihomonijaza;
• HPV infekcije;
• tuberkuloze;
• herpes infekcije 1. i 2. tip;
• Helicobacter pylori infekcije;
• citomegalovirus;
• difterije;
• salmoneloze;
• HIV infekciju.

Također, metode PCR se koriste u dijagnostici raka.

prednosti ove metode

Dijagnostički PCR ima nekoliko prednosti:

1. Visoka osjetljivost. Čak i sa samo nekoliko molekula DNK mikroorganizama PCR analiza određuje prisutnost infekcije. Pomaže metoda za hronične i latentne bolesti javljaju. Često u takvim slučajevima, mikroorganizam je neobrađeno i na druge načine.
2. U cilju ispitivanja pogodan materijal, kao što je pljuvačka, krv, seksualna selekcija, kosa, epitelne ćelije. Najčešći je test krvi i urogenitalne bris PCR.

3. Nije potreban produženi raste kultura. Automatskog proces dijagnostike omogućuje da dobije rezultatima studije nakon 4-5 sati.
4. Metoda je gotovo potpuno autentičan. Zabilježen samo izolirani slučajevi lažno negativan rezultat.
5. Sposobnost da se identifikuju nekoliko vrsta patogena u jednom uzorku materijala. Ovo ne samo da ubrzava proces dijagnoze bolesti, ali i značajno smanjuje materijalne troškove. Često, doktor propisuje sveobuhvatne analize PCR. Istraživanje cijena, koja se sastoji od određivanja šest patogena, je oko 1.500 rubalja.

Preporuke za pripremu za analizu

Rezultati da važi studija PCR treba testirati, u skladu sa preporukama preliminarne pripreme za dijagnozu:

1. Prije isporuke od pljuvačke treba da se uzdrži od jedenja i lijek za 4 sata prije uzorkovanja materijala. Neposredno prije nego što je postupak, isperite usta s kuhanim vodom.
2. Navedenih pravila moraju biti vođena i prilikom uzimanja uzorka iz unutrašnjosti obraza. Nakon ispiranja se preporučuje da izvrši svjetlo masaža na koži da oslobodi prostate sekreta.
3. Urin se obično prikupljaju kod kuće. Da biste to učinili, morate provesti temeljitu WC genitalija. U sterilnom plastični kontejner potrebno je prikupiti 50-60 ml urina. Ona preporučuje ženama da ubacite tampon u vaginu, a muškarci što je više moguće povući kožu preklopiti kako bi se osigurala čistoća materijala. Ne možete uzeti materijal za vrijeme menstruacije.
4. Za isporuku sperme da se uzdrže od seksualnih odnosa tokom 3 dana prije prikupljanje materijala. Također, doktori se savjetuje da napuste korištenje saune i toplu kupku, alkohol i začinjena jela. 3 sata prije analize je potrebno da se suzdrže od mokrenja.
5. Proći urogenitalnog bris, na primjer, ako je analiza na klamidiju PCR, i žene i muškarci se preporučuje da se seksualno ostatak za 3 dana. 2 tjedna prije analize ne može uzimati antibiotike. Za danas trebate prestati koristiti intimni gelovi, masti, vaginalni čepići, ispiranje. 3 sata prije studija treba da se suzdrže od mokrenja. Tokom menstruacije ograda materijal se ne vrši, samo 3 dana nakon prestanka mrlja može potrajati urogenitalnih brisa.

PCR u trudnoći

Period čeka bebu, mnoge zarazne bolesti, spolno prenosive bolesti, su izuzetno opasni za normalan razvoj fetusa. Spolno prenosive bolesti može izazvati intrauterinog razvoja, pobačaja ili preranog rođenja, kongenitalne malformacije djeteta. Stoga, važno je da se u ranoj trudnoći skrining PCR. Analiza prolaznosti potrebno prilikom registracije - do 12 tjedana.

Ograda materijal dolazi iz cervikalnog kanala sa posebnim četkicama. Postupak je bezbolan i ne predstavlja opasnost za bebu. Normalno u trudnoći analizirani na hlamidiju PCR metoda, kao i ureaplasmosis, mikoplazmoze, citomegalovirus, herpes, papiloma virus. Tako složene ispitivanje zove PCR 6.

PCR za dijagnozu HIV-a

S obzirom na činjenicu da je metoda lančane reakcije polimeraze je vrlo osjetljiva na promjene u organizmu i uslova dijagnoze, mnogi faktori mogu utjecati na ishod. Stoga analiza PCR HIV infekcije nije pouzdana metoda, njegova efikasnost - 96-98%. Preostalih 2-4% testa daje lažno pozitivne rezultate.

Međutim, u nekim situacijama, bez PCR dijagnoze HIV-a ne može učiniti. Obično se obavlja na ljude sa lažno negativnim ELISA. Ovi podaci ukazuju na to da je osoba još nije razvila antitijela na virus i ne može se otkriti bez povećanja broja više. Da se to može postići provođenjem test krvi PCR metodom.

Također potrebno je dijagnoza djece prve godine života, rođen HIV-pozitivnih majki. Metoda je jedini način da se pouzdano utvrditi status djeteta.

PCR za dijagnozu hepatitisa

Polimeraze metoda lančane reakcije omogućuje detekciju DNK virusa hepatitisa A, B, C, i pre formiranja antitela početka infekcije ili simptom. Posebno efikasan je analiza PCR na hepatitis C, s obzirom da 85% takvih bolesti su asimptomatski i bez pravovremeno liječenje postaje hronična.

Pravovremeno otkrivanje patogena će pomoći da se izbjegne komplikacije i dugotrajne terapije.

Integrated PCR skrining

Sveobuhvatne PCR analiza: šta je to? Ovaj screening metoda polimezarnoy lančane reakcije koja uključuje utvrđivanje istovremeno nekoliko vrsta infekcije: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, citomegalovirus, ureaplazma urealitikum, herpes 1. i 2. tip, gonoreja papiloma virus. Cena ove dijagnoze kreće se od 2.000 do 3.500 rubalja. ovisno o klinici, materijala i opreme, kao i o vrsti analize: kvalitativne ili kvantitativne. Ono što je potrebno u vašem slučaju - doktor odluči. U nekim slučajevima, vi jednostavno otkriti prisustvo patogena u drugima, kao što je HIV, važnu ulogu kvantitativnim titar. naziva "PCR analiza od 12" u dijagnostici svih gore navedenih patogena ispitivanja.

Dešifrovanje rezultati analize

analiza transkripcije PCR je jednostavna. Postoje samo 2 skali indeksa - ". Negativna" "pozitivne" i Po otkrivanju patogena može doktori sa 99% povjerenja -tom potvrditi prisustvo bolesti i početi liječenje pacijenta. U kvantitativnom načinu utvrđivanja infekcije u odgovarajući broj indeks stupca otkrivenih bakterija će biti naveden. Samo liječnik može odrediti obim bolesti i propisati potrebne tretman.

U nekim slučajevima, na primjer, u određivanju HIV infekcije PCR, s negativnim rezultatom, postoji potreba za dodatnim istraživanja da potvrdi ove brojke.

Gdje da se testiraju?

Gdje pass-PCR analiza u javnom klinike ili privatna laboratorija? Na žalost, u opštinskim medicinskim ustanovama opreme i metode su često zastarjeli. Stoga je bolje dati prednost privatnim laboratorijama sa modernom opremom i visoko kvalificirano osoblje. Osim toga, u privatnoj klinici ste dobili rezultate mnogo brže.

U Moskvi, mnoge privatne laboratorije nude PCR analiza za razne infekcije. Na primjer, u takvim klinikama kao "Vita", "Integrirani klinika", "Happy Family", "Uro-Pro", izvršena analiza PCR. Cijena Anketa je 200 rubalja. za određivanje patogena.

Može se zaključiti da je dijagnoza zaraznih bolesti PCR u većini slučajeva je brz i pouzdan način otkrivanja patogena u tijelu u ranoj fazi infekcije. Ipak, u nekim slučajevima, da izaberu druge metode dijagnoze. Određuju potrebu za takve studije može biti samo specijalista. PCR analiza Dešifrovanje također zahtijeva profesionalni pristup. Pratite savjete svog lekara i ne daju svoje testove, koji nisu potrebni.